什麼是Western Blot協議(Western Blot Protocol)？

Western blot協議是進行免疫印跡試驗的準確標準。Western blot用於檢測組織樣本中的蛋白質。該過程通過使用凝膠電泳測定多肽的長度來分離天然蛋白質。然後將蛋白質自身轉移到硝化纖維膜上進行探測通過抗體。護士wes...

Western blot協議是進行免疫印跡試驗的準確標準。Western blot用於檢測組織樣本中的蛋白質。該過程通過使用凝膠電泳測定多肽的長度來分離天然蛋白質。然後將蛋白質自身轉移到硝化纖維膜上進行探測通過抗體。護士western blot協議的第一部分從組織收集開始。這些樣本要麼從活組織中收集，要麼從細胞培養物中收集。組織被分解，並引入各種抑製劑，如蛋白酶或磷酸酶，以防止酶進行消化。這該方案的一部分通常在低溫下處理以保存組織。凝膠電泳過程是western blot協議的下一步。在這一部分，蛋白質可以通過分子量或電荷等多種因素來識別。這一過程通常是用聚丙烯酰胺凝膠和十二烷基硫酸鈉緩衝液來完成的。基本上，蛋白質帶負電，並在凝膠內向帶正電荷的電極移動。蛋白質的轉移整個western blot過程的下一個部分。在凝膠上放置一個薄膜，然後是濾紙。當通電時，蛋白質被拉入膜中。這被稱為分析的實際"印跡"部分。膜非常脆弱，很容易受到損害。正確的western blot協議需要一個稱為結合的步驟。為了防止抗體汙染蛋白質本身這需要加上一種防護措施，最常見的是使用脫脂奶粉和洗滌劑這與膜上的開放點結合，當加入抗體時，可以得到更清晰的結果。根據正確的方案，檢測是下一步。將蛋白質引入抗體中，抗體與一種特定的酶相連，這將為研究人員提供所需的信息。抗體與膜30分鍾或更長時間。之後，清洗膜並引入第二抗體，與第一種抗體結合。通常，發光劑被用來幫助科學家進行鑒定過程。再次清洗材料以去除任何未結合的物質。對染色帶大小的分析揭示了有關特定蛋白質突出程度和程度的信息。這通常要完成幾次，以確保正確的分析。選項用於檢測的包括x光、著色和化學藥品。

發表於 2020-09-18 09:30
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分類：科學教育

什麼是Western Blot協議(Western Blot Protocol)？

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